<td id="wgaye"><button id="wgaye"></button></td>
<wbr id="wgaye"><button id="wgaye"></button></wbr>
<td id="wgaye"><button id="wgaye"></button></td>
  • <td id="wgaye"><button id="wgaye"></button></td>
  • <table id="wgaye"></table>
  • 技術服務

    細胞染色方法大全


    1

    Hoechst染色



    hoechst可以穿過活細胞膜與細胞核結合 (主要為凋亡活細胞)在紫外光下

    將核染為藍色. Hoechst染細胞核會影響共聚焦顯微鏡對該樣本其他熒光的觀察效果.hoechst有hoechest33342和hoechst33258兩種  hoechsts33258,hoechst33342二者區別不大,但是hoechst33342對細胞的毒性作用更小一些,所以一般來說hoechsts33258用于細胞固定后再染色,而hoechst33342則可以對活細胞直接進行染色!



    2

    PI (Propidium Iodide碘化丙啶)染色



    是一種可對DNA染色的細胞核染色試劑,常用于細胞凋亡檢測. 碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一種核酸染料(紅色),它不能透過完整的細胞膜,但凋亡中晚期的細胞和壞死細胞由于細胞膜通透性的增加,PI 能夠透過細胞膜而使細胞核染紅.用PI單一染色觀測培養細胞,只能表示細胞的壞死情況,而不是凋亡(當然晚期凋亡PI亦可著色)。但是如果您只是想知道細胞的死亡情況,而不是仔細區分壞死或凋亡,那么PI單一染色也可以。但是如果您一定要認定細胞的凋亡,那么PI單一染色顯然不夠!



    3

    annexin-v染色



    細胞凋亡早期,細胞膜標志發生改變.其中,磷脂酰絲氨酸

    (Annexin-V,PS)外翻 ,Annexin-V 在Ca+存在的條件下與其高親和力特異性結合.這樣,Annexin-v 染色陽性,表示細胞處于早期凋亡狀態.Annexin-V結合不同的熒光抗體,就可以利用流式細胞儀、熒光顯微鏡以及共聚焦激光掃描顯微鏡檢測細胞凋亡的發生。Annexin V用FITC標記發綠色熒光;如果用PE標記就發紅色熒光。




    4

    JC-1染色



    JC-1是一種陽離子染料,可以在線粒體內聚集,低濃度時主要以單體(monomer)存在,發射光以綠光(~525nm)為主;而在高濃度時則可以形成多聚體(aggregation),發射光以紅光(-590nm)為主。線粒體本身存在一定的極性

    (polarization),其外膜為負極,內膜為正極。電位差由Ca2+、Na+和H+流調控。當線粒體狀態良好時對JC-l攝取量少,因而在線粒體內主要以單體的形式存在綠光強度/紅光強度的比值較高。在線粒體發生去極化(depolarization)時,線粒內JC-l的濃度較高,多以多聚體的形式存在,綠光強度/紅光強度的比值降低。JC-1染色的綠光強度/紅光強度僅取決于線粒體的膜電勢(membrane potential),而與線粒體的形態、體積和密度都無關,因而能更好地反映線粒體的功能狀態。由于凋亡發生的早期存在線粒體的去極性,因此,JC-1染色被用于檢測凋亡的早期發生。其實驗方法如下。 

    JC-l染色非常簡單。首先可將成品JC-1以DMSO配成儲存液(1~5mg/ml),儲存于-20℃,用時以培養液稀釋至10ug/ml終濃度。對貼壁細胞可以直接棄去培養液,漂洗細胞后直接加入染色液,10-30min后在熒光顯微鏡下或者激光共聚焦下觀察。線粒體狀態好時細胞以綠色為主,當紅光信號增強時,紅綠相疊,以橙色為主。該染色運用于懸浮細胞時還可以通過流式細胞儀進行檢測,收集紅/綠信號強度,計算其強度比。



    5

    鈣黃綠素-AM(Calcein-AM):



    Calcein -AM本身并不是熒光分子,但通過活細胞內的酯酶作用,Calcein -AM能脫去AM基,產生的Calcein能發出強綠色熒光(激發:490 nm,發射:515 nm)。因此Calcein -AM僅對活細胞染色




    細胞活力鑒定——臺盼藍染色法



    原理: 

    細胞損傷或死亡時,臺盼藍可穿透變性的細胞膜,與解體的DNA 結合,使其著色。而活細胞能阻止染料進入細胞內。故可以鑒別死細胞與活細胞。  

    用品: 

    1. 4%臺盼藍母液:稱取4g臺盼藍,加少量蒸餾水研磨,加雙蒸水至100ml,用濾紙過濾,4度保存。使用時。用PBS稀釋至0.4%。 2. 吸管、血細胞計數板、顯微鏡  

    步驟: 

    1、制備單細胞懸液。并作適當稀釋(106 細胞/ml) 2、染色:細胞懸液與0.4%臺盼藍溶液以9:1混合混勻。 3、計數:在三分鐘內,用計數板分別計數活細胞和死細胞  

    結果統計: 

    鏡下觀察,死細胞被染成淡藍色,而活細胞拒染。 根據下式求細胞活力: 

    活細胞率(%)= 活細胞總數/(活細胞總數+死細胞總數)×100  

    注意事項:臺盼藍染細胞時,時間不宜過長。否則,部分活細胞也會著色,會干擾計數。

    臺盼藍染色原理 

    通常認為細胞膜喪失完整性,細胞即可被認為已經死亡。臺盼藍(Trypan Blue)是檢測細胞膜完整性*常用的生物染色試劑。健康的正常細胞能夠排斥臺盼藍,而死亡的細胞,膜的完整性喪失,通透性增加,細胞可被臺盼藍染成藍色。依據此原理,細胞經臺盼藍染色后,可通過顯微鏡,直接鏡下計數或拍照后計數,實現對細胞存活率比較**的定量分析。 

    試述臺盼藍染發鑒別死活細胞的原理,試分析染色時間過長本來是活細胞也被染色的原因  

    死細胞的細胞膜無屏障作用,臺盼藍馬上進入細胞而顯藍色?;罴毎毎び羞x擇透性,對臺盼藍的透性小,進入細胞慢。若染色時間過長,臺盼藍可能通過胞吞或胞飲作用進入細胞。 


    聯系我們
    產品搜索

    細胞系,ATCC細胞,ATCC菌種,細胞系目錄,ATCC,鼠傷寒沙門氏菌,atcc細胞庫,人淋巴瘤細胞,人食管癌細胞,ATCC 19404,ATCC 25922,ATCC 19146,微生物菌種,細胞株,標準菌株,ATCC中國,atcc上海代理,CMCC 菌株,ATCC菌株,細胞目錄,質控菌株,腫瘤細胞株,乳腺癌細胞系,人肝癌細胞系

    產品目錄

    Copyright? 2003-2022  上海復祥生物科技有限公司版權所有            電話:021-35080510
    傳真:021-35080520    地址:上海市虹口區赤峰路630號南雁大廈1901室    郵編: 滬ICP備10013034號-3  

      

    滬公網安備 31010902002429號

    日本1000禁免费看,日本18禁羞羞网站入口,日本50成熟老妇人,日本A∨永久免费观看,日本AⅤ不卡的在线观看视频